酶標儀選購指南有哪些?

　　方法及其衡量的標準：用高精度紫外可見(jiàn)分光光度計（波長(cháng)精度±0.3nm）對不同波長(cháng)的濾光片進(jìn)行光譜掃描，檢測值與標定值之差即為濾光片波長(cháng)精度，其差值越接近于零且峰值越大表示濾光片的質(zhì)量越好，波長(cháng)精度越高。理論基礎：酶標儀的濾光片質(zhì)量好壞，直接影響儀器的靈敏度高低，而濾光片的質(zhì)量又是以其波長(cháng)精度及其峰值指標來(lái)衡量的，因此濾光片波長(cháng)精度及峰值是衡量酶標儀的重要參數之一，這在廠(chǎng)家的儀器說(shuō)明書(shū)中雖未曾提及，但在儀器的實(shí)際使用過(guò)程中，我們發(fā)現對濾光片波長(cháng)精度和峰值進(jìn)行檢查是重要的也是必要的，通過(guò)檢查可以發(fā)現濾光片的波長(cháng)標定值與實(shí)測值的符合程度，可以發(fā)現濾光片的質(zhì)量是否符合要求。

　　2、靈敏度和準確度的監測方法：

　?、凫`敏度：精確配制6ug/ml重鉻酸鉀（干燥）溶液（0.05mo1／L硫酸溶解），加入200ul重鉻酸鉀溶液于小孔杯中，以0.05mo1／L硫酸溶液作空白，于450nm（參比波長(cháng)650nm）測定，其吸光度應≥0.01A。

　?、跍蚀_度：準確配制：1mmo/L對硝基苯酚（提純品）水溶液，然后以10mmo1／L氫氧化鈉溶液25倍稀釋之，加入200ul稀釋液于小孔杯中，以10mmo1／LNaOH溶液作空白，于405nm（參比波長(cháng)650nm）檢測，其吸光度應在0.4A（0.395～0.408A）左右。說(shuō)明：儀器的靈敏度和準確度主要受兩個(gè)因素影響：一是濾光片波長(cháng)的精度，二是檢測器的質(zhì)量。通常情況下，濾光片原因導致儀器的靈敏度和準確度下降比較容易檢查；而檢測器質(zhì)量差異則不易被發(fā)現，因此我們采用上述兩種標準物質(zhì)溶液對儀器檢測器的質(zhì)量進(jìn)行定期監測，從而保證了儀器檢測結果的可靠性。對于儀器準確性的測定，我們采用了文獻報道的方法，經(jīng)過(guò)多次在不同型號儀器間進(jìn)行反復測定，結果發(fā)現該標準物溶液在450nm波長(cháng)處有一較為恒定的測定值，由于酶標儀與其它分光光度計的光學(xué)原理不*相同，故是否可以作為評價(jià)酶標儀準確性的參考方法還有待同行進(jìn)一步研究考證。

　　3、通道差與孔間差檢測方法及其表達方式：

　?、偻ǖ啦顧z測：

　　取一只酶標板小孔杯（杯底須光滑、透明、無(wú)劃痕、無(wú)污染）以酶標板架作載體，分別加入三種不同濃度的甲基橙溶液200ul后置于8個(gè)通道的相應位置，蒸餾水調零，采用雙波長(cháng)（測定波長(cháng)490nm，參比波長(cháng)630或650nm，以下均相同）連續測三次，觀(guān)察其不同通道之間測量結果的一致性可用極差值來(lái)表示其通道差。

　?、诳组g差的測量：

　　選擇同一廠(chǎng)家、同一批號酶標板條（8條共96孔）分別加入200ul甲基橙溶液（吸光度調至0.065～0.070A）先后置于同一通道，蒸餾水調零，采用雙波長(cháng)檢測，其誤差大小用±1.96s衡量。理論解釋?zhuān)簽榱颂岣呙笜藘x的檢測速度，根據96孔酶標板的規格特點(diǎn)，目前大多數廠(chǎng)家的中、高檔酶標儀均采用8通道的檢測器（部分中、低檔酶標儀目前仍采用單通道）．因而它們每個(gè)通道的檢測能力是不盡相同的，它是儀器內部的固有誤差，與所測溶液濃度成正相關(guān)（不同檢測器對不同濃度溶液的響應能力不同），所以通道差是衡量酶標儀性能良好與否的重要指標之一；其衡量指標用極差表示，這與廠(chǎng)家推薦的指標是一致的；極差值越接近于零，通道差越小，說(shuō)明同一樣品于不同通道檢測結果的一致性越好。由于不同廠(chǎng)家、不同批號酶標板之間的質(zhì)量差異，導致孔與孔之間的檢測結果也不*一致，這與水平光路光度計的比色皿質(zhì)量是否符合要求一樣，因此我們認為孔間差是儀器外部的固有誤差，只有準確測知孔間差，并對結果作出相應的校正，才能使檢驗結果更符合實(shí)際情況、更準確可靠；采用的評價(jià)指標（士1.96s）也是有利于結果校正的。另外，在設計孔間差測量的操作方法上，我們將200ul甲基橙溶液吸光度調至0.065～0.070A，是充分考慮到加樣器的誤差（上海求精公司，200ul，士2％CV），其目的是使加樣誤差控制在儀器的分辨率（0.01A）以下，這樣也就避免了孔間差結果不因加樣誤差而導致假性增高。

　　4、零點(diǎn)飄移方法：

　　取八只小孔杯，分別置于八個(gè)通道的相應位置，均加入200ul蒸餾水并調零，采用雙波長(cháng)或單波長(cháng)（490nm）每隔30min測定一次，觀(guān)察8個(gè)通道4h內的吸光度變化。其與零點(diǎn)的差值即為零點(diǎn)飄移。測量原理：酶標儀的零點(diǎn)飄移通常是很小的，這是由于儀器在讀數之前，先要做8個(gè)通道的本底測量（Io）．然后再讀取樣品板的各孔測定值（I），根據Beer'slaw光吸收值=1ogl0（Io／I），每次讀數經(jīng)過(guò)如此的自動(dòng)校正，使得讀數誤差大大降低，這樣的測讀方式無(wú)疑是非常正確的的；另外有的儀器是應用"DRLDYE"檢測試條來(lái)進(jìn)行絕對吸光度的校準的，因此在采用單波長(cháng)測量時(shí)，會(huì )導致吸光度的假性增高，這種儀器可采取兩種方法進(jìn)行校正，一是選擇一合適的參比濾光片進(jìn)行雙波長(cháng)測定，二是引入修正參數，即在吸光度模式下單波長(cháng)讀取1個(gè)空白孔，其測試值和預測值之差值即為修正參數。所以零點(diǎn)飄移是評價(jià)儀器在一定時(shí)間內零點(diǎn)吸光度的變化趨勢，與波長(cháng)無(wú)關(guān)，它間接地反映了儀器內部檢測系統在單位時(shí)間內處于工作狀態(tài)下的穩定性及儀器的機械性能情況（連續進(jìn)板、檢測、退出），故它是評估儀器內部電路系統、光學(xué)系統（檢測器）及機械系統良好與否的指標。

　　5、精密度評價(jià)方法及評價(jià)指標：

　　每個(gè)通道三只小杯，分別加入200ul高、中、低三種不同濃度的甲基橙溶液，蒸餾水調零，采用雙波長(cháng)作雙份平行測定，每日測定兩次，連續測定20天。分別計算其批內精密度、日內批間精密度、日間精密度和總精密度及相應的CV值。理論依據：1984年美國實(shí)驗室標準委員會(huì )發(fā)表了EP5一T文件并于1992年進(jìn)行了第二次修訂：化學(xué)儀器精密度性能的用戶(hù)評價(jià)。該評價(jià)方案在生化分析儀、血細胞計數儀等儀器和試劑的評價(jià)中得到了廣泛的應用，使評價(jià)儀器的方法得到了統一；而該法應用于酶標儀的評價(jià)在國內外則尚未見(jiàn)有類(lèi)似的報道，我們采用該法對酶標儀進(jìn)行系統評價(jià)，結果是比較滿(mǎn)意的。各指標的意義為：批內精密度系由20d中每天兩批，每批兩次之差（即"批內"）經(jīng)統計學(xué)處理后所得的結果；日內批間精密度系由20d中每天兩批測定結果均值之差（即"批間"）經(jīng)統計學(xué)處理后所得的結果；日間精密度表示20d中每天所測均值的標準差即標準誤，反映了每日均值的離散度；總精密度則是對批內、批間和日間精密度進(jìn)行加權統計的結果。其中以批內精密度和總精密度的應用最為廣泛，與傳統的批內精密度的計算方法（即對同一標本在同一天內同時(shí)重復測定多次）相比，前者更符合實(shí)驗室的實(shí)際情況，更有代表性，也更加合理；而總精密度則客觀(guān)地全面地反映了實(shí)驗室的總體變異情況。

　　6、線(xiàn)性測定方法：

　　精確稱(chēng)取甲基橙配制5個(gè)系列濃度的溶液，采用雙波長(cháng)平行檢測8次求其均值。計算回歸方程、相關(guān)系數r及標準估計誤差Sy,x，并用±1.96Sy,x表示樣品的95％測量范圍。評價(jià)指標解釋?zhuān)壕€(xiàn)性測定也是評價(jià)儀器的重要手段之一，因為它是儀器開(kāi)展定量工作的基礎和前提，某些廠(chǎng)家用標準估計誤差s來(lái)衡量線(xiàn)性，這與實(shí)驗室通常所采用的相關(guān)系數r是一致的，因此在進(jìn)行線(xiàn)性評估時(shí)，我們同時(shí)報告r和Sy,x，目的是為了增強用戶(hù)與廠(chǎng)家之間的可比性。

　　7、雙波長(cháng)評價(jià)

　　方法：在運用酶標儀檢測樣品時(shí)，由于溶液中的小氣泡、杯底的水紋印及劃痕、小孔杯之間透明度的差異等等，這些都是儀器測定過(guò)程中最常見(jiàn)的干擾因素，而標本中的干擾組份（如溶血、黃道）因洗滌而對測定結果影響則較小，因此我們將文獻中的雙被長(cháng)評價(jià)方法改為：取同一廠(chǎng)、同一批號酶標板條（每個(gè)通道2條共24孔）每孔加入200ul甲基橙溶液（吸光度調至0.065～0.070A）先后于8個(gè)通道分別采用單波長(cháng)（490nm）和雙波長(cháng)（測定波長(cháng)490nm、參比波長(cháng)630／650nm）進(jìn)行檢測，計算單波長(cháng)和雙波長(cháng)測定結果的均值、離散度，比較各組之間是否具有統計學(xué)差異以考察雙波長(cháng)清除干擾因素的效果。

　　說(shuō)明：雙波長(cháng)測定過(guò)程中，由于標本中干擾組份的存在以及小孔杯本身質(zhì)量等原因，常常導致測定結果的假性增高，而酶標儀提供的雙波長(cháng)測定功能則可以消除干擾組份或因素對測定結果的影響．對于標本中干擾組份的清除，在選擇參比波長(cháng)時(shí)，我們應對于擾組份的光譜進(jìn)行研究，以正確選擇參比波長(cháng)；而對于小孔杯本身質(zhì)量問(wèn)題等干擾因素的消除，只要選擇遠離測定波長(cháng)的參比波長(cháng)即可以了、這對保證測定結果的準確性是非常重要的。

　　1、目前，國內外有關(guān)酶標儀性能評價(jià)與鑒定方法的報道尚不多見(jiàn)，由于酶標儀在實(shí)驗室中的應用越來(lái)越普及，因而，建立一套完善的酶標儀性能評價(jià)方法并對儀器進(jìn)行全面的較為系統的綜合評價(jià)乃是實(shí)驗室工作人員的當務(wù)之急，這對進(jìn)一步增強儀器之間的可比性和保證ELA法的工作質(zhì)量是至關(guān)重要的，同時(shí)將其評價(jià)指標引入到檢測結果的校正工作中，合理地作出各個(gè)定性試驗項目的可信限與界值，對正確判讀結果和開(kāi)展定量檢測工作具有一定的指導意義。

　　2、在對酶標儀進(jìn)行評估時(shí)，還應對儀器的自動(dòng)化程度及售后服務(wù)有一個(gè)比較全面的了解。自動(dòng)化程度如儀器的分辨率（一般為0.001A）、報告的方式（通常提供4～6種以上的格式）、可提供濾光片的最大數目（有些廠(chǎng)家可根據用戶(hù)要求訂做）、是否提供用戶(hù)自編程序及外接微機的功能和軟件等等。

　　3、售后服務(wù)也是儀器使用順利與否的根本保證，用戶(hù)應當與信譽(yù)較好、服務(wù)周到、維修方便的代理商進(jìn)行恰談，以免儀器一旦出現故障，而不致于影響工作或使儀器處于癱瘓狀態(tài)不能發(fā)揮應有的社會(huì )效益和經(jīng)濟效益。

　　4、另外需要強調的是：由于酶標儀的種類(lèi)、型號繁多，每個(gè)儀器的測量原理也不盡相同，為了保證不同儀器之間測定結果的一致性，我們認為在測定時(shí)應采用雙波長(cháng)法，而且必須采用雙波長(cháng)，這樣既能消除干擾組份和干擾因素的影響，又能避免因儀器測量原理不同而造成儀器之間結果的不一一致性。